ЕЛИСА тест открива бројне болести, због чега је нашао широку примену у медицини и више. Међутим, ЕЛИСА тест је најпознатији по дијагнози Лајмске болести. Шта је ЕЛИСА тест? Како протумачити резултате? Која је цена теста?
Преглед садржаја:
- ЕЛИСА тест - шта открива? Примена ЕЛИСА теста
- ЕЛИСА тест - шта је тест?
- ЕЛИСА тест и Лајмска болест - када извршити?
- ЕЛИСА тест - цена. Колико кошта ЕЛИСА тест?
- ЕЛИСА тест - резултати. Могу ли бити лажно позитивни?
- ЕЛИСА тест - резултати. Могу ли бити лажно негативни?
ЕЛИСА тест, тј. Ензимски имунолошки тест, је уобичајена лабораторијска метода која служи, између осталог, за за квантитативно откривање антитела у крви.
Из тог разлога, ЕЛИСА тест је нашао примену у дијагнози бактеријских болести, попут лајмске борелиозе.
Предност ЕЛИСА методе је једноставност и могућност брзе примене као и велика осетљивост. ЕЛИСА метода се изводи помоћу посебних пластичних плоча са јамицама испуњеним, на пример, протеинима Боррелиа (антигенима) и специфичним моноклонским антителима, која су дизајнирана да открију антитела у узорку пацијента.
ЕЛИСА тест - шта открива? Примена ЕЛИСА теста
Висока осетљивост и једноставност ЕЛИСА методе учинили су је применљивом у дијагнози многих болести, али је најпознатија као дијагностичка метода Лајмске болести.
У случају дијагнозе лајмске борелиозе, тзв индиректни ЕЛИСА, који омогућава откривање специфичних ИгМ или ИгГ у испитиваном материјалу. На исти начин, антитела се могу открити за дијагнозу:
- вирусне инфекције: херпес вируси (херпес, херпес зостер, Епстеин-Барр, цитомегаловирус), ХИВ, вируси хепатитиса (ХБВ и ХЦВ)
- протозојске инфекције: токсоплазмоза, гиардијаза
- аутоимуне болести: целијакија (антитела на тТГ или анти-ДПГ), Хашимотова болест (антитела на ТГ и анти-ТПО), инфламаторне болести црева (антитела на АСЦА и анти-АНЦА)
- паразитске болести и алергије код којих се откривају специфична ИгЕ антитела. Њихов повећани ниво може указивати на присуство алергија, нпр. На полен и храну, или паразитску инвазију (наоружана тракавица, људска округла глиста)
Постоје и модификације ЕЛИСА методе (тзв. Сендвич ЕЛИСА), које омогућавају откривање узорка протеина који нису антитела. Тада је циљ теста да се у биолошком материјалу открије:
- фрагменти вируса или бактерија, најчешће су то антигени карактеристични за дати патоген
- серумски хормони, нпр. естроген, пролактин, ТСХ, фТ4, кортизол
- ензими, нпр. калпротектин, еластаза панкреаса, алкална фосфатаза
- туморски маркери, нпр. ЦА-125
- присуство лекова у серуму
Ова метода је такође применљива у прехрамбеној индустрији, где може открити количине алергена у траговима (нпр. Млеко, кикирики), ГМО или токсине у храни.
ЕЛИСА тест - о чему се ради?
Дијагноза, на пример, лајмске болести помоћу методе ЕЛИСА састоји се у откривању имуних протеина у биолошком материјалу - антитела која настају током одговора на антигене борелије.
Антитела се испитују у две класе, ИгМ и ИгГ. ИгМ су прва антитела која се појављују у телу када дођу у контакт са бактеријама и временом опадају.
Њихово место заузимају постојанија ИгГ антитела која могу остати у телу неколико десетина година.
На овај начин, присуство бактерија у телу се индиректно испитује откривањем антитела посебно усмерених против спирохета борелије.
Антитела у различитим фазама инфекције могу бити усмерена против различитих протеина борелије. На пример, у раној фази то је протеин п41.
У каснијим фазама почиње да се појављује све више и више протеина, као што су п21, п30, п39, п43. То је разлог зашто је дијагноза лајмске болести изузетно тешка.
Избор бактеријских протеина изузетно је важан да би тест имао високу дијагностичку вредност. Због тога би рутински у дијагнози Лајмске болести требало користити ЕЛИСА тестове ИИ или ИИИ генерације у којима се бирају сетови протеина како би се добио најпоузданији резултат.
ЕЛИСА тест и Лајмска болест. Када да се ради?
Лајмска борелиоза је бактеријска болест коју узрокују бактерије Боррелиа бургдорфери и њене бројне сорте.
Дијагноза болести није лака због сложености имунолошког одговора против борелије и несавршености лабораторијских метода.
Најчешће коришћена лабораторијска метода је високо осетљива ЕЛИСА метода која открива специфична антитела подигнута против бактеријских протеина.
У дијагнози лајмске борелиозе користи се индиректна ЕЛИСА метода у којој се разликују следеће фазе:
- инкубација јажица на плочи са материјалом прикупљеним од пацијента, нпр. серумом. Ако у испитиваном материјалу постоје антитела против борелије, она се вежу за протеине на дну реакционе бушотине
- затим се вишак серума испере посебном течношћу за прање (пуфер) и тзв коњугат, тј. антитело повезано са ензимом које се везује за претходно повезана антитела у реакционим јамицама
- тада се додаје супстрат за коњугат и одвија се реакција боје (позитиван резултат) или нема реакције боје (негативни резултат)
- последњи корак је очитавање (спектрофотометар) концентрације антитела против борелије у серуму пацијента
ЕЛИСА тест за Лајмску болест врши се из крви, а у случају неуролошких симптома (неуроборелиоза) и из цереброспиналне течности.
Синовијалну течност не треба тестирати јер постоји велика вероватноћа лажно позитивних резултата.
Основа за дијагнозу болести су клинички симптоми који то указују, потврђени резултатима лабораторијских тестова.
Додавање резултата лабораторијског испитивања без симптома не одобрава дијагнозу Лајмске болести, јер се показало да се антитела против борелије откривају и код здравих људи.
Серолошка дијагноза лајмске борелиозе започиње полуквантитативним скрининг ЕЛИСА тестом. Ако је резултат негативан, то значи да нису откривене спирохете борелије или је резултат лажно негативан.
Ако је резултат позитиван или слабо позитиван (двосмислен), треба извршити потврдно Вестерн блот тестирање, које карактерише велика специфичност.
Ово потврђује да су ЕЛИСА резултати „истинити“. Током дијагностике не можете прескочити ниједан од горе наведених корака и, на пример, одмах извршити дијагнозу методом Вестерн блот-а или поставити дијагнозу само на основу позитивног ЕЛИСА резултата.
У Пољској се дијагноза Лајмске болести врло често завршава у првој фази скрининга, што узрокује погрешно тумачење позитивних или слабо позитивних резултата.
Препоручени чланак:
Тест трансформације лимфоцита (ЛТТ) Добро је знатиЕЛИСА тест - цена. Колико кошта ЕЛИСА тест?
Тест кошта око 60 ПЛН и обавља се одмах. Међутим, на резултате упућивања можете сачекати око три месеца.
ЕЛИСА тест - резултати. Могу ли бити лажно позитивни?
Лажно позитивни резултати су резултат унакрсне реактивности ИгМ антитела са другим протеинима. Антитела која производи тело могу „нетачно“ препознати антиген других микроорганизама као антиген борелије.
Најчешће „грешке“ се јављају код особа заражених трепонема паллидум, херпесвирусима и код људи са системским еритематозним лупусом и другим реуматским болестима.
ЕЛИСА тест - резултати. Могу ли бити лажно негативни?
Лажно негативни резултати могу се појавити у раној фази инфекције, у том случају тест треба поновити након око 3-4 недеље. Ово се зове серолошки прозор, то је почетни период инфекције у којем тело још није „успело“ да произведе специфична антитела.
Исто тако, код људи са имунодефицијенцијом који не производе довољно антитела.
Велики проблем, посебно код врло интензивних инфекција, је појава тзв имуни комплекси који се састоје од антигена борелије и специфичних антитела за њих.
Као резултат, антитела постају „невидљива“ за најчешће коришћене методе као што је ЕЛИСА, и иако су присутна у испитиваном материјалу, не могу се открити.
У таквим случајевима лабораторија може користити разградњу имуних комплекса. Овај третман је дизајниран за ослобађање антитела. Међутим, ова метода се не користи широко због недостатка стандардизације у лабораторијама.
Вреди знатиЗашто дијагноза лајмске болести није лака?
То је због сложености имунолошког одговора против борелије и ограничења лабораторијских метода. Разноликост сорти и појава нових које узрокују инфекције, посебно на европском континенту, не олакшавају развој ефикасних дијагностичких метода.
У Европи се недавно појавило више сорти, попут Боррелиа биссетии, Боррелиа валаисиана и Боррелиа спиелмании. Поред тога, у телу се спирохете борелије могу претворити у цисте или остати на местима тела недоступним ћелијама имуног система.
Бити тако „невидљив“ за имуни систем. Поред тога, показано је да ткива могу садржати фрагменте бактерија које имају снажно проупално својство. Верује се да су одговорни за хроничне симптоме Лајмске болести, упркос негативним резултатима лабораторијских тестова.
Књижевност
1. Витецка-Книсз Е. и сар. Лајмска болест: зашто је дијагноза тако тешка? Лабораторијски дијагностичар, април 2007.
2. Мооре А. и сарадници: Тренутне смернице, уобичајене клиничке замке и будућа упутства за лабораторијску дијагнозу лајмске болести, Сједињене Државе. Емерг Инфецт Дис. 2016. јул; 22 (7).
3. Лабораторијска дијагностика болести које се преносе крпељима.Препоруке радне групе: Национална комора лабораторијских дијагностичара, Национални институт за јавно здравље-Национални институт за хигијену, Национални саветник за област заразних болести, Одељење за инфективне болести и неуроинфекције, Медицински универзитет у Биаłистоку, Пољско друштво за вирусологију, Варшава 2014.
4. Хоссеини С. и сар: Ензимски везани имуносорбентни тест (ЕЛИСА) од А до З. Спрингер 2017.
