Кариотип: цитогенетска студија и њени резултати

Кариотип је скуп свих хромозома који се налазе у језгру сваке соматске ћелије која их има, са бројем и структуром карактеристичним за сваку врсту. Тест кариотипа је врста цитогенетског теста који омогућава откривање абнормалности у броју (хромозомске нумеричке аберације) и структури хромозома (хромозомске структурне аберације).

Кариотип садржи комплетан сет хромозома који је јединствен за особу. Хромозоми су структуре направљене од ДНК и протеина, у свакој нуклеарној ћелији људског тела постоји 46 хромозома, укључујући 22 пара аутосома и 1 пар хетеросома, тј. Хромозоме који одређују пол.

Тест кариотипа је цитогенетски тест који омогућава откривање абнормалности у броју (хромозомске нумеричке аберације) и структури хромозома (хромозомске структурне аберације).

Познавање вашег кариотипа је посебно важно за људе који дуго и неуспешно покушавају да имају децу (у овом случају би то требало да раде оба партнера), жене које су много пута доживеле побачаје или оне које су родиле мртворођено дете, као и особе које пате од генетских болести изазване хромозомским аберацијама да би се потврдила дијагноза постављена на основу фенотипских карактеристика.

Преглед садржаја:

1. Нормални кариотип
2. Кариотип: сврха студије
3. Индикације за одређивање и испитивање кариотипа
4. Кариотип: материјал за студију
5. Како се врши каритотип?
6. Презентација резултата кариотипа
7. Кариотип: време и цена теста

Нормални кариотип

Нормални кариотип човека састоји се од 46 хромозома, од којих су 23 наследјени од мајке (ово је језгро ћелија женских полних ћелија - јајна ћелија), а 23 од оца (садржаних у језгру ћелија мушких полних ћелија - сперматозоида).

Међу хромозомским сетом има 22 пара аутосома (одговорних за наслеђивање и пренос свих карактеристика осим оних повезаних са полом) и 1 пар хетеросома (одговорних за наследство особина повезаних са полом).

Кариотип је описан бројевима који представљају укупан број хромозома у соматској ћелији и великим словима Кс и И која представљају полне хромозоме.

Нормални женски кариотип описан је као 46, КСКС (дакле, састоји се од 46 хромозома, од којих су 2 Кс хромозома хромозоми који одређују пол), а нормални мушки кариотип је описан као 46, КСИ (слично томе, састоји се од 46 хромозома, а пол је одређена са два хетеросома, Кс и И).

Кариотип: сврха цитогенетског теста

Цитогенетски преглед и кариотипизација се врше како би се проверило да ли су број и структура хромозома пацијента тачни. Абнормалности у броју хромозома називају се хромозомске аберације, међу којима се разликују:

• нумеричке аберације хромозома

Абнормалности у броју хромозома са нормалном морфологијом обично су последица абнормалне деобе ћелија. Истиче:

• Полиплоидне (еуплоидне) ћелије, које карактерише множење броја хаплоидних хромозома (1н = 23 хромозома) типичних за репродуктивне ћелије, нпр. Триплоидне ћелије (3н = 69 хромозома; кариотип 69, КСКСИ), тетраплоидне (4н = 92 хромозома; кариотип 92 , КСКСКСИ). Такве аберације нису честе, а код људи су обично смртоносне
  
  
• Анеуплоидне ћелије, које карактерише повећани или смањени број појединачних хромозома са правилном структуром. Такве аберације могу утицати и на аутосоме и на хромозоме који одређују пол. Примери синдрома болести изазваних абнормалним бројем хромозома у ћелијама укључују:
  - моносомија - Турнеров синдром 45, Кс0 (недостаје један полни хромозом)
  - трисомија - Довнов синдром 47, КСКС, +21 или 47, КСИ, +21 (додатни хромозом 21 у пару)

• Структурне аберације хромозома

Они су поремећаји у структури хромозома, чији је број у соматској ћелији тачан. Међу најчешћим су:

• делеција (губитак фрагмента крака хромозома)
• дуплирање (удвостручавање одређеног фрагмента крака хромозома)
• уметање (уметање додатног фрагмента другог хромозома у кратки или дуги крак хромозома)
• инверзија (окретање дела крака хромозома за 180 степени)
• транслокација (пренос дела крака хромозома у други хромозом)
• прстенасти хромозоми (настају када се један или више хромозома покида и поново повеже)

Индикације за одређивање и испитивање кариотипа

Цитогенетски тестови и кариотипизација се изводе код одраслих, парова који покушавају да затрудне, трудница и деце. Постоји много индикација за такву дијагностику, посебно:

• Репродуктивни неуспех

- неплодност пара (дефинисано је као да није трудна упркос редовном сексуалном односу 3-4 пута недељно у минималном периоду од 1 године без употребе било ког облика контрацепције)
- поновљени побачаји и потешкоће у одржавању трудноће
- мртворођенче
- рађање детета са генетски условљеном болешћу повезаном са појавом абнормалности у броју или структури хромозома
- испитивање кариотипа код партнера који желе да се подвргну вантелесној оплодњи

• Генетска пренатална дијагноза је назначена у несрећи

- поодмакла доб мајке (жене старије од 35 година) у време трудноће
- абнормалности у броју или структури хромозома код родитеља детета или браће и сестара
- абнормални резултати пренаталних тестова заснованих на неинвазивним техникама снимања фетуса помоћу ултразвука, што може указивати на повећани ризик од хромозомских аберација у фетусу (повећана прозирност грлића материце, поремећаји развоја носне кости)

• Дијагностика болести изазваних хромозомским аберацијама

- пацијент има фенотипске особине које указују на присуство специфичног хромозомског синдрома или дисморфичне особине за потврђивање дијагнозе
- присуство болести узрокованих хромозомским аберацијама у ужој породици

• Поремећаји полне диференцијације

- абнормална структура спољашњих гениталија што онемогућава јасно одређивање пола новорођенчета
- нема знакова полног сазревања

Кариотип: материјал за студију

Материјал за испитивање је обично:

• Периферни венски лимфоцити
  
  
• Амниоцити, који су љуштене ћелије фетуса које се налазе у амнионској течности труднице. Њихово испитивање омогућава утврђивање кариотипа фетуса. Прикупљање амнионске течности (амниоцентеза, амниоцентеза) у специјалним центрима врши посебно обучени гинеколог под контролом ултразвучне опреме. Састоји се од увођења игле за убод кроз трбушни зид мајке у амнионску шупљину и сакупљања 15-20 мл плодне воде. То је инвазивни тест са многим компликацијама, укључујући ризик од губитка трудноће, уочавање мрља из гениталног тракта, цурење амнионске течности, као и интраутерину инфекцију, интраутерину смрт или повреду игле. Могу се изводити између 15 и 20 недеље трудноће.
  
  
• Ћелије сакупљене током узорковања хорионских ресица
  
  
• Узорковање хорионских ресица врши се између 9. и 12. недеље трудноће. То је инвазивни тест са многим компликацијама, сличан тесту амниоцентезе.
  
  
• Феталне крвне ћелије сакупљене током кодроцентезе
  
  
• Кордоцентеза, односно пункција пупчане врпце иглом за пункцију под строгом контролом ултразвука. Изводи се након 16. недеље трудноће ради сакупљања феталне крви ради прегледа. То је инвазивни тест који се изводи ретко и повезан је са могућношћу многих компликација, сличних перформансама амниоцентезе и узорковања хорионских ресица.
• Фибробласти добијени културом ткива
  
  
• Ћелије изведене из канцерозних тумора

Како се врши каритотип?

Тестирање комплетног сета хромозома може се обавити тестирањем било које нуклеарне ћелије у телу, али најчешћи тестови су лимфоцити периферне крви.

Узорак мале количине пацијентове венске периферне крви узима се као стандард за основни тест крви, као што је комплетна крвна слика. Није потребна претходна припрема пацијента за преглед, може се обавити у било које доба дана, а пацијент не мора бити на празан стомак.

Да би се извршио цитогенетски тест, потребно је из узорка крви добити лимфоците инхибиране у одговарајућој фази дељења ћелија (митоза) - метафази. Због тога се ћелије гаје ин витро. Употребом стимулатора ћелијске деобе стимулишу се да се множе.

Када ћелије дођу до стадијума митотске метафазе, даје се посебна супстанца која инхибира процес множења у изабраној фази митозе. У фази метафазе, хромозоми су најбоље развијени и најлакши је начин да их детаљно анализирају. Следећи корак у тесту кариотипа је бојење хромозома како би се добио карактеристични узорак пруга сваког хромозома.

На основу тога, анализатор је у стању да препозна одговарајуће хромозоме и подели их у хомологне парове. Анализа броја и структуре хромозома могућа је захваљујући употреби специјализоване опреме, тачног светлосног микроскопа и рачунарског софтвера.

Презентација резултата кариотипа

Добијени и обојени хромозоми морају се препознати и поделити у одговарајуће хомологне парове хромозома означених бројевима од 1 до 22. Њихова идентификација је могућа захваљујући распореду трака карактеристичних за сваки од хромозома. Хетеросоми, или полни хромозоми, обележени су словима Кс и И.

Графичка расподела 22 пара хромозома и 1 пара аутосома назива се кариограм. Да бисте је извели, потребно је направити фотомикрографију посебно обојених хромозома ухапшених у фази митотске метафазе. Добијени хромозоми су исечени са фотографија и поређани у хомологне парове према њиховој величини, положају центромере и узорцима пруга.

Кариотип: време и цена теста

Обично су потребне 2 до 4 недеље да се изврши цитогенетски тест и развије кариотип, јер је потребно да се успостави ин витро култура тест ћелија и заустави дељење ћелија у одговарајућој фази.

Кариотип пацијента може се одредити и приватно у цитогенетској лабораторији и надокнадити од стране Националног здравственог фонда.

Цена теста изведеног у приватним условима варира око 500 ПЛН и може се мало разликовати у зависности од лабораторије у којој се врши.